乙醇被*為是一種可以替代汽油的液體燃料，也是很好的燃油品質(zhì)改善劑，甘蔗可以生成乙醇燃料。為提高甘蔗發(fā)酵效率，可提取釀酒酵母a288c基因組，克隆INO1基因，在工業(yè)釀酒酵母中過表達(dá)，提高菌種耐乙醇能力，提高細(xì)胞活力。下面簡單介紹下提取和擴(kuò)增過程。

　　釀酒酵母基因組提取

　　原始釀酒酵母菌株s288c活化后，使用YPD固體培養(yǎng)基進(jìn)行平皿劃線分離得到釀酒酵母菌株s288c單菌落，牙簽挑取單菌落接至50ml YPD液體培養(yǎng)基進(jìn)行30 ℃搖瓶培養(yǎng)24-30 h，用高速冷凍離心機(jī)去上清（采用高速冷凍離心機(jī)保護(hù)樣本生物活性）；按照釀酒酵母基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。

　　INO1基因序列擴(kuò)增

　　以釀酒酵母S288C基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件如下：預(yù)變性94℃ 5 min，變性94℃30s，退火54℃ 30s,延伸72℃ 97s，30個循環(huán)，延長72℃。10min保存4℃。反應(yīng)結(jié)束后取2 uL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物于1％瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測。采用膠回收試劑盒進(jìn)行膠回收。

　　回收后的PC產(chǎn)物進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化和菌液PCR檢測，z后進(jìn)行質(zhì)粒提取和測序。